高純度保障:經(jīng)CD31/PECAM-1免疫熒光鑒定,純度≥90%,附完整質(zhì)檢報(bào)告
無菌保障體系:通過14天支原體/細(xì)菌/真菌多重檢測(cè),HIV-1/HBV/HCV陰性認(rèn)證
組織特異性:精準(zhǔn)分離自肺動(dòng)脈干內(nèi)層,完整保留天然血管功能特性
細(xì)胞形態(tài)
呈現(xiàn)典型"鋪路石"狀單層多角形分布,完-美模擬體內(nèi)血管內(nèi)皮屏障結(jié)構(gòu),為研究血管通透性調(diào)節(jié)提供理想模型。
增殖能力
可穩(wěn)定傳代2-3代,建議接種密度為5×10? cells/cm2,滿足短期實(shí)驗(yàn)需求(如血管生成研究、炎癥反應(yīng)模擬等)。
冷凍保存
采用程序降溫+含DMSO保護(hù)液的標(biāo)準(zhǔn)化流程,解凍后細(xì)胞活力≥85%,確保實(shí)驗(yàn)重復(fù)性。
雙酶定向消化技術(shù)
胰蛋白酶(0.25%)+ 膠原酶Ⅳ(200U/mL)聯(lián)合處理
37℃振蕩消化30min,精準(zhǔn)分離內(nèi)皮層
差速貼壁法去除成纖維細(xì)胞污染(貼壁時(shí)間差15min)
七維質(zhì)檢體系
形態(tài)學(xué)鑒定:倒置顯微鏡觀察典型內(nèi)皮細(xì)胞特征
表面標(biāo)記檢測(cè):CD31/CD34流式細(xì)胞術(shù)驗(yàn)證
功能驗(yàn)證:乙?;疞DL攝取實(shí)驗(yàn)確認(rèn)內(nèi)皮特性
微生物檢測(cè):PCR+培養(yǎng)法雙重驗(yàn)證無菌狀態(tài)
活力檢測(cè):臺(tái)盼藍(lán)排除法確保細(xì)胞活性
遺傳穩(wěn)定性:STR基因型分析排除交叉污染
交叉污染檢測(cè):ISO認(rèn)證細(xì)胞庫比對(duì)確認(rèn)種屬特異性
血管生物學(xué)研究
肺動(dòng)脈高壓模型構(gòu)建(hypoxia/PDGF-BB誘導(dǎo))
內(nèi)皮屏障功能調(diào)控(VEGF/TNF-α刺激實(shí)驗(yàn))
一氧化氮合成途徑研究
藥物篩選平臺(tái)
抗血管新生藥物測(cè)試(Matrigel管形成實(shí)驗(yàn))
血栓調(diào)節(jié)藥物開發(fā)(凝血酶敏感性檢測(cè))
納米藥物遞送系統(tǒng)靶向性驗(yàn)證
疾病機(jī)制探究
慢性阻塞性肺病(COPD)相關(guān)內(nèi)皮損傷
新冠-肺炎肺血管微血栓形成研究
糖尿病血管并發(fā)癥模型構(gòu)建
專用培養(yǎng)基CM-M343
基礎(chǔ)成分:DMEM/F12 + 10%優(yōu)質(zhì)FBS
生長(zhǎng)因子:bFGF(5ng/mL)+ EGF(2ng/mL)
保護(hù)添加劑:谷氨酰胺(2mM)+ 抗氧化劑(0.5mM)
培養(yǎng)建議
包被處理:PLL(0.1mg/mL)或明膠(0.1%)預(yù)處理培養(yǎng)器皿
換液策略:初始48h靜置培養(yǎng),之后每2天半量換液
傳代時(shí)機(jī):當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)80-90%時(shí),用0.25%胰酶消化